怎样用酶联免疫吸附法测乙酰胆碱受体抗体？
摘要：
B加入乙酰胆碱受体：每支乙酰胆碱受体干粉加蒸馏水04ml混匀。再1∶10稀释备用。10μl（1∶10R）+10mlPBS-T混匀，每孔100μl，37℃1h。PBS-T洗3次，每次3min。
（1）酶联免疫吸附试验的简要原理
先用α-银环蛇毒素包被于塑料板上4℃冰箱过夜。加乙酰胆碱受体，由于乙酰胆碱受体与α-银环蛇毒素之间特异性、不可逆性结合而使乙酰胆碱受体也间接结合于塑料板上。加标准抗血清或待测血清，若有乙酰胆碱受体抗体，通过乙酰胆碱受体抗体与乙酰胆碱受体间特异性结合而固定于塑料板上。加酶标的二抗、显色。有颜色的地方就是有二抗的地方，可由颜色的深浅来反映标本中乙酰胆碱受体抗体的含量多少。
（2）酶联免疫吸附法测定乙酰胆碱受体抗体的程序
A包被：用α-银环蛇毒素（1mg/ml）10μl+包被液10ml，每孔100μl，24h4℃保存，PBS-T洗3次，每次3min。
B加入乙酰胆碱受体：每支乙酰胆碱受体干粉加蒸馏水04ml混匀。再1∶10稀释备用。10μl（1∶10R）+10mlPBS-T混匀，每孔100μl，37℃1h。PBS-T洗3次，每次3min。
C血清及乙酰胆碱受体抗体工作标准：病人血清或稀释的乙酰胆碱受体抗体工作标准液，每孔100μl，37℃30min。PBS-T洗3次，每次3min。
D结合物：辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG结合物，每支溶于05ml蒸馏水中。取其溶解物30μl结合物加15mlPBS-T混匀，每孔100μl，37℃30min。PBS-T洗3次。
E底物：邻苯二胺4mg+底物缓冲液10ml+3％
过氧化氢15μl（用时现配）每孔100μl，暗处37℃5min。
F终止：2mol/LH2SO4，每孔50μl。
G测OD：490nm波长下检测OD值。
（3）乙酰胆碱受体抗体测定中ELISA试验缓冲液的配制
①包被液：pH96，Na2CO3159g，NaHCO3293g，蒸馏水加到1000ml，4℃保存。
②PHS-T：pH74，KH2PO402g，Na2HPO4·12H2O29g，NaCl80g，KCl02g，Tween-2005ml，蒸馏水加至1000ml，4℃保存。
③底物缓冲液
A液：01mol/L柠檬酸缓冲液。柠檬酸（分子量＝2014）2104g加蒸馏水至1000ml。
B液：02mol/L磷酸缓冲液。Na2HPO4·12H2O（分子量＝35814）716g加蒸馏水至1000ml。
取A液243ml，B液257ml，加蒸馏水至100ml（每10ml加H2O215μl加邻苯二胺现用现加）。
④2mol/LH2SO4。
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