有报道
恶性肿瘤病人在用α-
干扰素(interferon-α,INF-α)治疗期间出现自身免疫性重症
肌无力。还有一些慢性丙型肝炎病人在用INF-α治疗后发生重症肌无力。有人用INF-α治疗实验性变态反应性重症肌无力有效而建议应该用INF-α治疗重症肌无力。还有报道有易患重症肌无力
遗传素质的丙型肝炎病人在用INF-α治疗期间发生严重重症肌无力。一般建议对有家族性重症肌无力证据的病人应不用或慎用INF-α。
怎样自人腓肠肌提取乙酰胆碱受体?
(1)乙酰胆碱受体的提取
A腓肠肌去除结缔组织后称重15~30g,把肌肉分装入若干管内,每管内装肌肉25g。
B每管内加入1mol/LKBr(5ml/g)和MSF(1μl/g)。放入匀浆器内匀浆。每次匀浆45s停15s,重复3次。
C匀浆经尼龙网过滤,每管用1mol/LKBr(5ml/g)冲洗。
D5000g离心10min。用1mol/LKBr(5ml/g)和MSF(1μl/g)使之再悬浮。
E5000g离心10min。用2%(W/V)tritonX-100(2ml/g)和MSF(1μl/g)使之再悬浮。在Vortex上振动使之混匀。用parafilm封口后置4℃孵育过夜。
F39000g离心30min,弃沉淀,取上清液经WhatmanGF/B玻璃纤维过滤。把过滤液置于已经用缓冲液A平衡了的50mlHTP柱上。(留1~2ml作为乙酰胆碱受体的粗制品)。
G用缓冲液A冲洗,每次22ml。按组分收集,直至缓冲液变清。
H每一组分洗液测OD280值。
I用后清洗HTP柱:配制2mol/LK2HPO4液。用双蒸水洗2次或3次,每次半小时。用2mol/L的K2HPO4洗2或3次。再用双蒸水洗2或3次。用缓冲液A来平衡,并用缓冲液A来保存。
(2)所需液体的制备
A制备HTP:称HTP粉,并用含1%tritonX-100的PBS使之充胀,半小时内洗3~4次,把细颗粒洗掉。用2gHTP做3柱。
B缓冲液A(用于为HTP柱洗去杂蛋白)
01mol/LNaCl,10mmol/LTris-HCl,1mmol/L
EDTA,002%NaN3,1%TritonX-100
01mol/LNaCl(分子量为5844):5844g/L
10mmol/LTris-HCl(分子量为12114):12114g/L(用HCl把pH调节到74)
1mmol/LEDTA(无水EDTA的分子量为3362)。每升中含20mmol/L溶液50ml
002%NaN3:每升中含2%NaN310ml
1%TritonX-100:每升中含20%TritonX-100溶液50ml
C缓冲液B(用于为HTP柱洗去杂蛋白)
150mmol/LPO4pH=74,1%Triton,002%NaN3,1mmol/LEDTA
150mmol/LPO4pH=74
每升中含02mol/LNaH2PO41425ml
每升中含02mol/LNaH2PO46055ml
1%TritonX-100:每升中含20%TritonX-100500ml
002%NaN3:2%NaN31ml
1mmol/LEDTA:每升中含20mmol/LEDTA50ml
42mol/LK2HPO4
一面搅拌,一面把17418gK2HPO4逐渐加入500ml温热的双蒸水中。