热盐水试验

热盐水试验概述

热盐水试验是利用热盐水对血细胞进行检查，用于检查细胞核溶解情况。

• 检查部位 其他
• 科室 内科体检、保健科
• 相关疾病 贫血
• 相关症状 静脉出血 动脉出血 反复出血 白血病细胞浸润 口渴

热盐水试验正常值

• 细胞核不溶解、细胞形态清晰为阴性。

热盐水试验临床意义

• 异常结果：检查结果为阳性。在粒细胞系统中，中幼粒细胞以下各阶段细胞的大部分，细胞核被溶解而且程度明显(++-+++)。原始粒细胞的细胞核较少被溶解或不溶解，程度也轻(+-++)。早幼粒细胞细胞核溶解情况介于二者之间。淋巴与单核细胞一般不溶解，偶见轻度溶解(+)。以溶解(+)以上的幼稚细胞>10%为诊断界限。急性粒细胞诊断符合率达78.5%，而急性单核或淋巴细胞均不符合。有助于急性白血病细胞类型的鉴别。但幼稚细胞溶解(+)以下，<10%，不能完全排除急性粒细胞白血病。　
  需要检查的人群：有贫血、出血、感染、发热明显特征的人群。

热盐水试验检查方法

• 1. 样本处理：
  a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。
  b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800*g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5*107个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，再加入50ul Reagent A，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20~30次。
  2. 将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中，4℃，700*g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀;
  3. 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中，置于Medium Buffer之上，4℃， 700*g 离心5min。将上清转移到新离心管，细胞核沉淀在管底;
  4. 弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉，1000*g 离心10min ，弃上清，得较纯的细胞核沉淀;
  5. 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

热盐水试验注意事项

• 不合宜人群：无。
  检查前禁忌：检查前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。体检前一天的晚八时以后，应禁食。
  检查时要求：
  1. 为保证获得完整的细胞核，第一是全程低温操作。第二是快速。第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备细胞核的最关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
  2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
  3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。