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羊水细胞培养染色体检查

羊水细胞培养染色体检查概述

由于有害化学物质、X线照射、环境因素影响,高龄妊娠,近亲配婚等,导致妊娠时染色体的数目、形态、结构及结合上发生变异所引起的疾病。羊水细胞的染色体检查,对染色体疾病的产前诊断具有很大的特异性意义。

羊水细胞培养染色体检查正常值

  • 染色体总数46条。
    常染色体22对(序号为1~22)。
    性染色体男性为XY,女性为XX。
    男性核型46,XY。
    女性核型46,XX。

羊水细胞培养染色体检查临床意义

  • 染色体数量异常如唐氏综合征(21三体综合征)、18三体综合征、13三体综合征、8三体综合征、22三体综合征、先天性睾丸发育不全综合征、XXY综合征、特纳综合征、X三体综合征和多X体综合征等。
    染色体结构异常如4p部分单体综合征、5p部分单体综合征、9p部分三体综合征、9q部分单体综合征、21q部分单体综合征、22q部分单体综合征、22q部分三体综合征等。

羊水细胞培养染色体检查检查方法

  • (1)取孕期16~20周羊水15~30ml,1000r/ml离心10min。
    (2)弃去多余上清液,留1ml羊水和沉淀细胞,轻轻打散成细胞悬液。
    (3)移入25ml方形培养瓶中,加pH6.5~6.8(含青霉素100U/ml,链霉素100μg/ml)的培养基3ml及小牛血清1ml,置37℃温箱中培养。
    (4)培养7~10天后可见大量成纤维样或上皮样细胞集落。此时可调换新鲜培养液。
    (5)待细胞集落扩大成片,并有许多透亮的圆形分裂细胞时,即可加入秋水仙素,使最终浓度为0.1~0.3μg/ml,置37℃温箱中再培养5~6h(上述过程均在无菌条件下进行)。收获标准:①以成纤维细胞为主要类型,成片细胞生长;②以10倍目镜和20倍物镜观察,生长的细胞克隆覆盖1个或1个以上完整视野;③见到10个以上透亮的圆形细胞和10个以上双圆形光亮的分裂细胞。
    (6)如果细胞生长不旺盛,生长周期不齐或细胞老化,未达收获标准,可在原瓶继续传代培养。方法:在无菌条件下先倒去培养液,加入2.5g/L无菌胰蛋白酶液数滴,摇动后倒去。再加入胰蛋白酶5~10滴,在37℃下轻轻摇动约5min,使贴壁细胞脱落。加入含小牛血清的新鲜培养基4ml,在37℃静置培养4~5h。再小心更换培养液,继续培养,一般传代后3~5天即可收获。
    (7)将培养液移至刻度离心管中,加ED-TA-胰蛋白酶液1ml于培养瓶内,置37℃温箱中5min,然后用弯头吸管冲洗贴壁细胞(也可用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化)。将脱离瓶壁的细胞倒入离心管中,与原培养液相混合,并用少量温热生理盐水冲洗培养瓶,洗下的细胞也一并倒入该离心管,以1000r/min离心10min。
    (8)吸弃上清液,加入预温37℃的0.075mol/L KCl低渗液3~5ml,置37℃10~15min。
    (9)预固定、固定及制片均与外周血细胞染色体标本的制备法相同。 

羊水细胞培养染色体检查注意事项

  • 1、染色体检查须于妊娠16~20周时取羊水标本。
    2、这些先天性遗传病的染色体有增多、缺乏、易位、倒置等数量和结构的异常,常表现为一种综合征。如多发性畸形、生长迟缓和智力缺陷等,多数导致胎儿流产、早产或死产。 

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