甲型肝炎抗原概述
甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)为一直径为27~32nm的二十面体立体对称圆球形颗粒,无包膜,核心为单链正股RNA。HAV属小RNA病毒科嗜肝病毒属(hepatovirus)或嗜肝RNA病毒属(heparnavirus)。HAV主要通过手-口途径传播,潜伏期15~50天,平均28天。病毒常在患者血清ALT升高前的5~6天就存在于患者的血液和粪便中。发病2~3周后,随血清中特异抗体的产生,血清和粪便的传染性就逐渐消失。HAV的实验室诊断可进行抗原检测。
甲型肝炎抗原正常值
阴性。
甲型肝炎抗原临床意义
HAVAg存在于病人感染后10~20d的粪便中,一般在发病前1~15d从粪便中排出,临床上不易捕捉到。发病1周时阳性率42.9%,1~2周时为18.3%,半个月后消失。因此,临床上较少用。如果HAVAg阳性,表示病人正在感染甲肝,为急性期早期。
甲型肝炎抗原检查方法
1、甲型肝炎抗原的测定原理
夹心ELISA法,即包被抗-HAV,加待检血清,再加酶标记抗-HAV,加底物显色,酶标仪测定OD值。若用硝酸纤维素膜(NC)代替聚苯乙烯板,即NG-EIA法,抗原的检测可得到加强,能检测到1ng的HAV蛋白,相当于1.5×104病毒颗粒。
2、试剂
国内有商品化试剂盒供应,内含抗μ链包被的反应板(条),HAV应用液,抗HAV-HRP标记物,以及抗HAV IgM阴、阳性对照血清,样品稀释液,洗涤液,底物液及终止液等试剂。
3、操作方法
应按试剂盒说明书进行检测。一般试剂盒分两类。
(1)三步法:本法操作步骤较多,检测费时,有逐渐被二步法取代的趋势。
①加稀释样品:在包被反应板(条)孔内加入1∶1000倍稀释样品100μl,每次实验有阴、阳性对照,37℃保温2h,洗板3次。
②加HAV:各孔加HAV 100μl,37℃ 1h后移至4℃过夜,洗板3次。
③加抗HAV-HRP:各孔加抗HAV-HRP 100μl,37℃保温3h,洗板4次。
④显色:各孔加入底物液100μl,37℃保温15min。
⑤终止反应:各孔加入终止液50μl。
⑥结果判读。
目测法:无色或略带淡黄色为阴性,橘黄色为阳性。
比色法:在酶标仪上以试剂空白校零点,测各孔在492nm光密度值,当样品A值/阴性对照A值大于或等于4为阳性,低于4为阴性。
(2)二步法操作:按上法加稀释样品保温、洗涤后,同时各孔加HAV 50μl及抗HAV-HRP 50μl,混匀后37℃保温1h,洗板4次,以后同上法显色和判读结果。
甲型肝炎抗原注意事项
检查前:不随便乱吃东西,特别是含又酒精和油腻的东西。
检查时:放松身心。