血清蛋白电泳（SPE）

血清蛋白电泳（SPE）概述

蛋白质在碱性条件下带不同量的负电荷，在电场中由阴极向阳极泳动。醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶是目前最常采用的两大介质。由于白蛋白等电点的差异，电泳后由正极到负极可分为，白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白五个区带，血清蛋白电泳初步了解血清白蛋白中主要组分的一种技术方法，通过血清蛋白电泳来反映肝细胞损伤程度和病变范围。也可用于反映其他疾病如肾脏疾病，风湿免疫系统疾病等。

• 检查部位 全身
• 科室 内科
• 相关疾病 小儿早老症 肝硬化男性性功能减弱综合征 肝硬化 小儿肾淀粉样变性 心原性肝硬化 肾病综合征 类风湿性关节炎 慢性肾炎 风湿性关节炎 系统性红斑狼疮所致精神病 系统性红斑狼疮性关节炎 抗胰蛋白酶缺乏症 先天性梅毒性肝硬化 巨球蛋白血症 药物性肝硬化 病毒性肝炎 胆汁性肝硬化 小儿原发性肾病综合征 原发性胆汁性肝硬化 营养不良性肝硬化
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• 相关症状 腹痛 脊柱和四肢畸形 恶心与呕吐 腹泻 咳嗽 咳痰 烟酸缺乏 血红蛋白尿 脓尿 乳糜尿 血尿 少尿 多尿 尿失禁与遗尿 排尿困难及尿潴留 发热 尿频伴尿急和尿痛 腹胀 急性肾衰竭 蛋白尿
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血清蛋白电泳（SPE）正常值

• 1.琼脂糖法： 白蛋白48%～64% α1-球蛋白2.5%～5.4% α2-球蛋白8.3%～l4% β-球蛋白8.7%～l5% γ-球蛋白12%～l5% 2.醋酸纤维薄膜法： 白蛋白57%～68% α1-球蛋白0.8%～5.7% α2-球蛋白4.9%～11.2% β-球蛋白7.0%～l3% γ-球蛋白9.8%～18.2%

血清蛋白电泳（SPE）临床意义

• 1、白蛋白减少见于慢性肝炎、肝硬化、肝癌等。
  2、α1球蛋白(糖蛋白)增高见于原发性肝癌。在重型肝炎、肝硬化、肝昏迷时则减少，与白蛋白呈正相关。肝病时测定α1球蛋白对判断肝炎的严重程度和预后有参考价值。一般情况下，α1球蛋白增加示病情较轻，α1球蛋白减少则提示病情较重，在严重肝功能衰竭时，其血清含量可显著降低。
  3、α2球蛋白病毒性肝炎初期无明显变化，一周后逐渐增加，亚急性肝炎和急性肝坏死、失代偿期肝硬化则减少。
  4、β球蛋白增高见于脂肪肝、高脂血症、肾病综合征、糖尿病合并高胆固醇血症、梗阻性黄疸、恶性肿瘤。在胆汁淤积性肝病时其含量升高，与α2球蛋白升高相平行。降低于见于急、慢性肝炎，肝硬化，尤以失代偿期肝硬化和坏死肝硬化下降最为显著。
  5、 γ球蛋白增高见于慢性肝炎、肝硬化、肝胆疾患。典型肝硬化尚可见β和γ带相融合，形成β-γ桥。肝病患者γ球蛋白的变化可反映病情的严重程度。随病情好转，其含量可逐渐降至正常，如一直在高水平持续不降，提示病情严重，预后不良，并有向慢性肝炎及肝硬化发展的趋势。此外，感染、血吸虫病、多发性骨髓瘤、结缔组织病等也可升高。降低见于丙种球蛋白缺乏症、部分化疗患者等。
  另外，多发性骨髓瘤在β球蛋白区带与γ球蛋白区带之间常出现M球蛋白带;双白蛋白血症可见双条白蛋白区带。

血清蛋白电泳（SPE）检查方法

• 1、将缓冲液加入电泳槽内，调节两侧槽内的缓冲液，使其处于同一平面。
  2、醋酸纤维素薄膜的准备：取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线，做点样标记。编号，并标明正、负极后，将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡，待充分浸透后(一般为20min)取出，夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。
  3、将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3～5μl于横线处沿横线加样，样品应与薄膜的边缘保持一定的距离，以免电泳图谱中的蛋白区带变形，待血清渗入薄膜后，反转薄膜，使光面朝上，平直地贴于电泳槽支架上，用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通，稍待片刻。
  4、接通电源，注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极，切勿接错。电压90～150v，电流0.4～0.6mA/cm(不同的电泳仪所需电压，电流可能不同，应灵活掌握)，夏季通电45min，冬季通电时间稍长，约为60min，电泳区带展开约25～35mm即可。
  5、染色：通电完毕，取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中，染色5～10min(以白蛋白区带染透为止)，然后在漂洗液中漂去剩余染料，直至背景无色为止。
  6、定量：
  ①比色法：将漂洗的薄膜吸干，剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中，在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2)，其余各管加3ml，振摇数次，置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度，然后计算出各管的含量(同时做空白管对照)。
  丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠，加入量同上法。10min后，白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml(计算吸光度时乘以2)，其余各管加0.3ml，以中和部分氢氧化钠，使色泽加深，必要时离心，取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度(同时作空白对照)，然后计算各自的含量。
  ②光密度计扫描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液(为防止透明液被稀释影响透明结果)，将薄膜浸入透明液中2～3min，然后取出，以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上(切勿产生气泡)，将此玻片竖立片刻，除去多余透明液后，置于恒温90℃至100℃的烘箱内，烘烤10～15min，取出冷却至室温，用此法透明的各蛋白区带鲜明，薄膜平整，可供直接扫描和永久保存(用氢萘或液体石蜡透明，应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明，此法透明的薄膜不能存久，且易发生皱折)。B.扫描定量：将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内，进行扫描分析。 

血清蛋白电泳（SPE）注意事项

• 1、空腹12小时，抽取静脉血化验，标本一定要新鲜血液。
  2、化验前要告知医生近期所服用的药物以及近期的生理改变。
  3、下列情况可出现生理性升高：
  （1）α1-球蛋白升高可见于妊娠6个月后。
  （2）α2-球蛋白升高可见于出生1～6个月的婴儿，妊娠4～6个月中度升高，7～9个月显著升高。
  （3）β-球蛋白升高见于婴儿出生后、妊娠4～6个月。
  （4）γ-球蛋白升高见于预防接种免疫疫苗后。