红细胞渗透脆性试验(ROFT)概述
正常红细胞为双凹圆盘形,在低渗盐水中溪水膨胀的适应性大,一般可增加70%的体积而不破裂。红细胞渗透脆性是测定红细胞对不同低渗盐水溶液的抵抗力。这种抵抗力与红细胞表面积与体积的比值有关。表面积大的体积小者对低渗盐水抵抗力较大(脆性低);反之则抵抗力较小(脆性增加)。本试验对确定溶血性贫血和鉴别黄疸的种类有一定的参考价值。
红细胞渗透脆性试验(ROFT)正常值
开始溶血:4.2-4.6g/L NaCl (71.8-78.6mmoL/L)
完全溶血:2.8-3.29g/L NaCl (47.9-54.7mmoL/L)。
红细胞渗透脆性试验(ROFT)临床意义
1.脆性增加:试验结果与正常对照比较,提高0.04%者即有意义。 见于遗传性球形红细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多症,也可见于遗传性椭圆形红细胞增多症和部分遗传性口形红细胞增多症患者。
2.脆性减低: 见于缺铁性贫血、地中海性贫血、链状细胞贫血、靶形红细胞增多症、血红蛋白增多症、脾切除术后、肝脏疾病、阻塞性黄疸等。
红细胞渗透脆性试验(ROFT)检查方法
1、制备不同浓度的NaCl溶液。先配置1%浓度的低渗NaCl溶液100ml,然后去口径相同的干净试管12支,编号排列在试管架上,按下表分别向各试管内加入1%NaCl溶液和蒸馏水后混匀,配置12种0.68%~0.24%不同浓度的低渗NaCl溶液。
2、分别配置0.85%浓度的NaCl溶液、1.9%浓度的尿素溶液。另取3支小试管,编号13~15,分别盛2.5ml 0.85%NaCl溶液。1.9%尿素溶液和蒸馏水。
3、碘酒、酒精消毒皮肤后用灭菌干燥的、肝素湿润的注入器从肘正中静脉取2ml,利己混匀,将其中1ml加入试管,余血一次向15支试管内各加入1滴,轻轻混匀。
4、观察13、14、15管的变化,其余12管在室温下静置1小时,然后观察混合液的颜色和透明度。
(1)试管内液体完全变成透明红色,说明红细胞全部破裂,称完全溶血。
(2)试管内液体下层为浑浊红色,上层为透明红色,表示部分虹吸包破裂,称不完全溶血。
(3)试管内下层为浑浊红色,上层为无色透明,说明红细胞全部没有破裂。
5、记录试验结果。包括受试者姓名和红细胞渗透脆性范围(即最小抵抗力的NaCl溶液浓度和最大抵抗力的NaCl溶液浓度)以及13~15管的结果。
6、取第6管和第13管混合液各1滴于载玻片上,盖上盖玻片,在显微镜下观察红细胞形态。
红细胞渗透脆性试验(ROFT)注意事项
(1)每次检查均应有正常对照,正常对照与被检者相差0.04%,即有临床意义。
(2)试剂配制时要求准确,一二个月要更换1次试剂,因水蒸发可致NaCl浓度增加。
(3)取血时应防止红细胞破坏。
(4)抗凝剂以肝素为宜若用去纤维蛋白血,柠檬酸或草酸盐,可以增加离子强度影响渗透压。
(5)如开始及完全溶血的结果不易判断,可以离心沉淀后进行观察。
(6)地中海贫血的渗透脆性降低,应进行低浓度NaCl溶液的检查。
(7)严重贫血者,要把RBC配成50%浓度,黄疸者要洗红细胞。
(8)血标本在冰箱中保存不得超过6h。