流感疫苗的生产及质量控制

流感是由流感病毒引起的可大规模流行的急性呼吸道传染病。流感与普通感冒相比，症状更加严重，传染性更强，抗生素治疗无效。全球每年约5%-10%的成人和20%-30%的儿童罹患季节性流感，据WHO数据，流感每年的季节性流行会导致300-500万重症病例，以及25-50万人死亡，接种流感疫苗是预防控制流感的最经济有效的手段。

一、流感疫苗的生产概况

流感疫苗系用世界卫生组织（WHO）推荐的大流感病毒株接种鸡胚，经培养、收获病毒液、灭活病毒、浓缩和纯化后制成。用于预防大流行流感病毒引起的人流行性感冒。

目前市场上的流感疫苗主要有全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和亚单位疫苗，国产和进口产品均有销售。每种疫苗均含有甲1亚型、甲3亚型和乙型3种流感灭活病毒或抗原组份。这三种疫苗的免疫原性和副作用相差不大。

1全病毒灭活疫苗

流感病毒接种于9－10日龄鸡胚尿囊腔中，l－2d后冷胚收获尿囊液，用福尔马林处理，灭活试验和无菌试验合格后，采用差速离心或柱层析方法对尿囊液进行浓缩和纯化，得到病毒原液，各项检验合格后进行分包装，获得流感全病毒灭活疫苗。流感全病毒灭活疫苗具有较高的免疫原性和相对较低的生产成本，但是在接种过程中副反应发生率也较高，同时不得应用于6岁以下儿童。这些都限制了流感全病毒疫苗的应用。

2裂解疫苗

裂解型流感灭活疫苗是建立在流感全病毒灭活疫苗的基础上，通过选择适当的裂解剂和裂解条件裂解流感病毒，去除病毒核酸和大分子蛋白，保留抗原有效成分HA和NA以及部分M蛋白和NP蛋白，经过不同的生产工艺去除裂解剂和纯化有效抗原成分制备而成。现今使用的裂解剂主要包括如：乙醚、3－N－丁基磷酸盐（Tri－N－butylphosphate）、聚山梨酸酯80（Polysothat80）、脱氧胆酸钠（Sodiumdeoxyholate）及三硝基甲苯XI00（TritoX100）等，裂解型流感疫苗可降低全病毒灭活疫苗的接种副反应，并保持相对较高的免疫原性，可扩大疫苗的使用范围，但在制备过程中须添加和去除裂解剂。

3亚单位疫苗

20世纪70和80年代，在裂解疫苗的基础上，又研制出了毒粒亚单位和表面抗原（HA和NA）疫苗。通过选择合适的裂解剂和裂解条件，将流感病毒膜蛋白HA和NA裂解下来，选用适当的纯化方法得到纯化的HA和NA蛋白。亚单位型流感疫苗具有很纯的抗原组分。

多年的临床应用表明流感灭活疫苗具有很好的免疫效果和临床安全性，接种人体后可刺激机体产生相应抗体，但是不能刺激产生分泌型免疫球蛋白（sIgA），这是灭活疫苗共有的缺点。此外，制备流感灭活疫苗必须使用特殊的无菌鸡胚，并且新流行的抗原变异株必须能在鸡胚中高效复制，才有可能生产大量流感病毒制备疫苗。随着制备疫苗所用的野生型病毒在鸡蛋中生长，其免疫原性在一定程度上被改变或降低。流感灭活疫苗对同型病毒感染有效，对异型病毒感染效果较差。

二、流感疫苗的质量控制

根据药典三部《流感全病毒灭活疫苗》及《流感病毒裂解疫苗》，主要介绍一下流感疫苗的原液、半成品及成品的质量控制要求：

1单价病毒原液的检定

纯化后的病毒液（或病毒裂解液）经除菌过滤后即为单价病毒原液，需要进行以下项目的检测：

1.鉴别试验

用相应（亚）型流感病毒特异性免疫血清进行血凝抑制试验或单向免疫扩散试验，结果应证明抗原性与推荐病毒株一致。

2.病毒灭活验证试验

将病毒灭活后的供试品10倍系列稀释，取原倍、10－1及10－2倍稀释的病毒液分组接种鸡胚尿囊腔，每组接种10个9～11日龄鸡胚，每胚接种0.2ml，置33～35℃培养72小时。24小时内死亡的不计数，每组鸡胚须至少存活80%。自存活的鸡胚中每胚取0.5ml尿囊液，按组混合后，再盲传一代，每组各接种10个胚，每胚接种0.2ml，经33～35℃培育72小时后，取尿囊液进行血凝试验，结果应不出现血凝反应。

3.血凝素含量

采用单向免疫扩散试验检测血凝素含量。将抗原参考品和供试品分别加入到含有抗体参考品抗体的1.5%琼脂糖凝胶板上，孔径为3mm，每孔10μl，于20～25℃放置至少18个小时。用PBS浸泡1小时后，干燥、染色、脱色。准确测量抗原参考品和供试品形成的沉淀环的直径，以抗原参考品形成的沉淀环的直径对其相应抗原浓度进行直线回归，求出直线回归方程，代入供试品的沉淀环直径，即可得到供试品的血凝素含量，应不低于90μg/（株·ml）。

4．无菌检查

依法检查（《中国药典》三部附录XIIA），应符合规定。