戊型肝炎病毒(HEV)感染是全球最常见的急性肝炎病因,其疾病负担并不轻,但奇怪的是,过去对于HEV在人类肝脏中的定位一直都不清楚。这个难题近日被瑞士苏黎世大学医院的病理和分子病理学家攻克,研究于近日在线发表于JournalofHepatology杂志。
研究者对成功转染HEV开放阅读框(ORF)1-3蛋白表达载体的Huh-7细胞进行甲醛固定和石蜡包埋,使用一组针对HEVORF1-3蛋白的抗体(共12种)进行免疫组化检测(IHC),并使用两种探针进行原位杂交试验(ISH),随后对感染HEV并有病毒复制的Hep293TT细胞、来自戊型肝炎患者的肝脏标本(20份)以及对照肝脏标本(134份)进行了IHC(部分还进行了ISH)。
结果发现,在表达HEV蛋白质的转染细胞中能够检测到所有ORF1-3蛋白,但在复制性感染HEV的细胞中,仅可追踪到ORF2和ORF3蛋白,并且非常明确的是,在戊型肝炎患者的肝脏标本中,仅能检测到ORF2编码的衣壳蛋白。
对ORF2蛋白进行IHC可见该蛋白在单个肝细胞或一群肝细胞中呈斑块状表达,通常在慢性肝炎中的表达强于急性肝炎。除见于细胞质和毛细胆管外,ORF2蛋白还可见于细胞核,这在过去从未发现。在特定区域,ORF2蛋白阳性与ISH检测到HEVRNA相关联。IHC的方法特异性好,且其灵敏度与PCR检测HEVRNA的灵敏度相似。
因此,研究者认为,在戊型肝炎患者的肝脏中,ORF2蛋白质可通过免疫组化的方法检出,方法可靠,并且具有特异性和灵敏性,因此可以用于对甲醛固定和石蜡包埋的标本进行HEV检测。
此外,在同一个肝脏标本的不同肝细胞中,该蛋白的亚细胞定位不同,这提示在病毒感染及与核组分相互作用的过程中,ORF2蛋白出现了再分布。
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