万氏牛黄清心丸的主要成分是牛黄10g，朱砂60g，黄连200g，黄芩120g，栀子120g，郁金80g。主要用于治疗流行性乙型脑炎，麻疹病毒性脑炎，麻疹后并发支气管性肺炎，百日咳并发脑膜脑炎等。那么，万氏牛黄清心丸的测定方法是怎样？

1、方法名称：万氏牛黄清心丸—黄连的测定—薄层扫描法

应用范围：该方法采用薄层扫描法测定万氏牛黄清心丸中黄连的含量。

该方法适用于万氏牛黄清心丸中黄连的测定。

方法原理：供试品经盐酸-甲醇（1：100）加热回流，过滤，用甲醇定量制成供试液，点样，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2）为展开剂，在另槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15分钟，展开，取出，晾干，照薄层色谱扫描法进行荧光扫描，激发波长λ=366nm，测量供试品荧光强度的积分值与对照品荧光强度的积分值，计算其含量。

试剂：盐酸、甲醇、乙酸乙酯、异丙醇、苯

仪器设备：薄层扫描仪、点样器（一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材）、展开室（可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭）。

2、材料：玻板（用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干）。吸附剂（硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。）

试样制备：A、对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL各含0.02mg的溶液，作为对照品溶液。B、供试品溶液的制备：取装量差异项下该品适量，剪碎，取适量，精密称定，精密加入等量的硅藻土，研匀，精密称取约1.6g，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇（1：100）混合液适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至100mL量瓶中，用少量盐酸-甲醇（1：100）混合液洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加混合液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

3、操作步骤：A、薄层板制备：将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm）取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。

B、点样：精密吸取供试品溶液4μL、对照品溶液2μL与6μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

C、展开：将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2）为展开剂，在另槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15分钟，展开，取出，晾干，取出，晾干。

D、含量测定：在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，用双波长进行扫描，波长：λS=510nm，λR=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。

用外标法测定时，若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点法校正，如不通过原点通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。

温馨提示：如在用药过程有任何不良反应或疑惑，可向方舟健客在线医生咨询，热线电话:400-086-5111。

（实习编辑：叶思敏）